5種致瀉大腸埃希氏菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速檢測(cè)技術(shù)_王芳妹
摘要：將５種致瀉大腸埃希氏菌的毒力基因保守序列進(jìn) 行設(shè)計(jì)并合成了引物和探針，建立的多重實(shí)時(shí)熒光PCR4種試劑盒可以同時(shí)檢測(cè)５種致瀉大腸埃希氏菌。結(jié)果表明：4種試劑盒的12對(duì)毒力基因通過(guò)５種 致 瀉 大 腸 埃 希氏菌的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株均得到驗(yàn)證；并且12對(duì)毒力基因只對(duì)對(duì)應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌特異性起作用，對(duì)常見(jiàn)的食 源性致病菌都無(wú)擴(kuò)增曲線；escV、bfpB、stx1、ipaH和invE基因的檢出限是10CFU／mL,aggR 基因的檢出限是102CFU／mL,astA和pic基因的檢出限是103CFU／mL,而stx2A、ipaH和stIb基因菌液濃度＜10CFU／mL時(shí)， 均可觀察到明顯的“Ｓ”型擴(kuò)增曲線，且線形較好；并且對(duì)抽查和委托檢驗(yàn)的肉 類、奶和動(dòng)物腹瀉物以及人工污染 樣品等 40份樣品進(jìn)行檢測(cè)，共檢出11份陽(yáng)性樣本，與GB4789.6—2016標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果相一致，表明建立的４種 試劑盒方法具有良好的實(shí)用性。?
關(guān)鍵詞：致瀉大腸埃希氏菌；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；毒力基因
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